由於家中有藥房買的穿心蓮藥品,好奇其中是否有抗氧化成分,因許多學術研究有說對抗癌有滿好的功效,那抗氧化呢?所以以此做為實驗。另外,除了穿心蓮藥品之外,還測試了穿心蓮標準品以及維生素C標準品。
本次實驗分為兩個部分:A. 抗氧化自由基測試 B.總多酚含量測定
以下為本次實驗使用的材料及藥品,由左→右為:
Folin&Clocalteu’s phenol reagent→Sodium carbonate(Na2CO3)→ Galic acid → Ethyl –Alcohol
α,α-Diphenyl-β-picryl-hydrazyl (DPPH),由於DPPH需要在冷藏溫度下存放,所以必須等到實驗時再從冰箱拿出,且溫度必須依然保存於冷藏下的溫度所以配置時加入冰塊以保冷。
Trizma base
Hydrochloric acid(HCL)
A. 抗氧化清除自由基測試
一、實驗步驟:
參考Yamaguchi等人之方法,取100μl不同濃度之試樣及50%乙醇溶液為對照組,依序加入400μl Tris-HCL緩衝液及500μl新鮮配置的DPPH乙醇溶液,振盪後於暗示靜置20分鐘,以分光光度計檢測517nm之吸光值。當吸光值越低表示樣品清除DPPH自由基能力越強。
DPPH 自由基清除效應百分率(Scavenging effects %)=(1-(實驗組吸收值/對照組吸收值))× 100%。
二、實驗結果:
上圖為 維生素C標準品、穿心蓮標準品及穿心蓮藥品三者之自由基清除效力比較
根據吸光值測試後計算出來的清除自由基能力結果顯示(圖1)為維生素C標準品>穿心蓮藥品>穿心蓮標準品,根據許多研究資料及學者提出維生素C本身就是極好的抗氧化物質,所以三者比較起來清除自由基為最好的毫無疑問,而穿心蓮藥品與穿心蓮標準品比較起來,穿心蓮標準品完全無法清除自由基與市售穿心蓮藥品比較起來滿出乎意料的,推測市售的穿心蓮藥品也許有添加能抗氧化之物質。
B.總多酚含量測定
一、實驗步驟:
參考Sato等人方法,取400μl之試樣或不同濃度(0.003125~0.1mg/ml)之galic acid / 50 % 乙醇溶液作為標準品,加入400μl Folin&Clocalteu’s phenol reagent經振盪混和後靜置3分鐘,再加入40μl 10 % Na2CO3 溶液,每隔10分鐘振盪一次,1小時候以分光光度計檢測735nm之吸光值。並對照標準曲線以換算每克萃取物中所含galic acid毫克數(mg/g,as galic acid)。吸光值越高表示樣品所含之總多酚類化合物含量越多。
二、實驗結果:
上圖為 維生素C標準品、穿心蓮標準品、穿心蓮藥品三者之多酚類化合物含量比較
根據吸光值測試後再以galic acid / 50 % 酒精之標準曲線(圖2)計算出三者之多酚含量(表1)資料結果顯示多酚含量維生素C標準品>穿心蓮標準品=穿心蓮藥品,維生素C總多酚含量最多抗氧化能力最強。
試樣名稱
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Total phenolicsa(mg)
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維生素C標準品
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1.079
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穿心蓮藥品
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0.990
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穿心蓮標準品
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0.993
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上表為維生素C標準品、穿心蓮標準品及穿心蓮藥品三者之多酚類含量
總結論
不論DPPH清除自由基效率比較或者是多酚類含量多寡,都是維生素C效果最強,而穿心蓮的市售藥品,推測也許有額外添加抗氧化物質,因為穿心蓮的標準品由測出來的吸光值完全沒有清除自由基的能力,多酚類含量也極少,所以對於抗氧化能力沒什麼太大的功效,這點還滿可惜,根據許多研究及資料有提及穿心蓮是一種滿好的抗癌藥物,但是實驗數值顯示出沒有抗氧化能力,所以或許吃穿心蓮作為保健功效的時候,也可多吃含維生C的天然食品,兩者兼具可保健身體。
Ying-Ru本次實驗小小心得
第一次能夠這樣自己從找實驗材料到摸索實驗過程最後成果出來,覺得好有成就感,座實驗室要很小心且很細心的!秤量藥品、滴定藥品等等都是不容許開玩笑地,必須全神貫注,不然很容易忘記自己做到哪一步驟,接著要做什麼,
非常考驗耐心與細心度。同時也感謝帶領我做實驗的指導老師,終於對實驗室感覺有稍稍熟悉的感覺了!但是還是很嫩阿QAQ,同時覺得做實驗好燒錢啊, 附上認真實驗側臉照一張XD